凡人修炼脂质体秘籍1----传承篇

发布时间：2021-09-22

凡人，指脂质体菜鸟。菜鸟变大虾，必须经过传承。

从上古时代到如今，失传的东西太多了。前人的经验，师徒间的传授和继承，智慧的畅想、文化的传承和现实的技术相结合，才不会迷失，才不会绕圈子走老路，才会有机会和发展。本文主要总结了脂质体的研究公司，相关指南，在研和已上市产品，可参考的脂质体书籍，国内进行脂质体研究的主要院校专家，**文献查阅途径，脂质体的前景。供大家参考学习。

1.脂质体是谁，从哪来，到哪去

生物学定义：当两性分子如磷脂和鞘脂分散于水相时，分子的疏水尾部倾向于聚集在一起，避开水相，而亲水头部暴露在水相，形成具有双分子层结构的的封闭囊泡，称为脂质体。

药剂学定义 ：脂质体 (liposome): 系指将药物包封于类脂质双分子层内而形成的微型泡囊体。利用脂质体可以和细胞膜融合的特点，将药物或活性分子送入细胞内部，可将毒副作用大、稳定性差、降解快的药物包裹在脂质体内,携带药物浓集于病灶部位,达到靶向给药的目的,从而提高疗效、降低毒性、增强稳定性。

脂质体是1965年由英国学者Bangham和Standish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层均为脂质的双分子层；囊泡**和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为4nm。1971年英国莱门等人将脂质体用于药物载体。脂质体（liposome）是一种人工膜。在水中磷脂分子亲水头部插入水中，脂质体疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体，直径25~1000nm不等。按结构和粒径，脂质体可分为单室脂质体、多室脂质体、含有表面活性剂的脂质体。按性能，脂质体可分为一般脂质体（包括上述单室脂质体、多室脂质体和多相脂质体等）、特殊性能脂质体、热敏脂质体、PH敏感脂质体、超声波敏感脂质体、光敏脂质体和磁性脂质体等。按荷电性，脂质体可分为中性脂质体、负电性脂质体、正电性脂质体。

目前，脂质体技术的研究已从常规囊泡发展到“第二代脂质体”，在第二代脂质体中，通过调节脂质的组成、大小和电荷来可以获长循环脂质体。还可以使用例如糖脂、PEG或唾液酸等分子，开发具有修饰表面的脂质体。

2.有法必依：脂质体相关法规指南  

关于脂质体的法规指南不多，国外有美国FDA 关于脂质体开发指导原则和2015年 FDA Liposome Drug Products脂质体药物制药工业指南草案。国内在 2020年11月30日 颁布了盐酸多柔比星脂质体注射液仿制药研究技术指导原则（试行）。

3.国外脂质体公司的技术平台和产品

国际上脂质体药物的应用已经有几十年历史，全球已有十几个脂质体制剂上市，大多为国外企业开发。***公司包括Transave、Polymun、Skyepharma、Lipoxen、Neopharm、INEX、Biomira、Aphios、Antigenics、OSI公司等。下面介绍一些开发脂质体药物的外国公司所采用的技术平台和开发的产品。

3.1 ALZA

ALZA的技术平台是STEALTH.liposomes，实际上就是长循环脂质体技术。传统的脂质体在体内很容易被免疫系统识别和吞噬，脂质体可能还没到靶区就被机体**了。采用STEALTH.技术，脂质体表面覆盖着一层PEG(polyethyleneglycol)凝胶，可以逃脱免疫系统的吞噬和破坏。如长循环脂质体的粒径小于150nm，它可以有效的穿透**区的血管，在**区富集，改变了药物在体内的分布，降低了毒性。ALZA采用STEALTH.技术，已经成功的开发了阿霉素脂质体注射液Doxil.。Doxil.主要用于**复发性卵巢*和AIDS相关的Kaposi’s肉瘤。

3.2 Antigenics

有两个脂质体产品：Aroplatin.和ATRA-IV.。ATRA-IV.（又名ATRAGEN.）是全反式维甲酸（all-trans-retinoicacid）的脂质体注射制剂。全反式维甲酸主要用于**急性早幼性骨髓性白血病（acutepromyelocyticleukemia）,但是它的口服制剂存在一个重要缺陷，那就是药效的持续时间太短。将其制成脂质体制剂后，药物的血药浓度增加，起效时间明显延长。现在Antigenics受FDA委托，正在研究用ATRA-IV.**T细胞非Hodgkin氏淋巴瘤（Tcellnon-Hodgkin’slymphoma）的可行性。Aroplatin.是第三代铂类**药物，它的结构和奥沙利铂(Oxaliplatin.)相似。细胞实验表明，Aroplatin.可能用于**对其他铂类药物（卡铂carboplatin,顺铂cisplatin）产生耐药性的**。用Aroplatin.脂质体**结肠*的实验正在进行中。

3.3 Aphios

Aphios公司的技术平台是采用超临界流体技术制备纳米级单分散的脂质体，该技术与醇注入技术不同的是溶解磷脂和胆固醇时采用的是超临界流体。目前已经成功的将紫杉醇（paclitaxel）,喜树碱（camptothecin）等难溶**物制成了脂质体制剂。临床实验表明：Taxosomes.（紫杉醇脂质体）的毒性远小于Taxol.（紫杉醇注射液），并且其**乳腺*的有效性是Taxol.的2倍左右。

3.4 BernaBiotech

BernaBiotech公司采用Virosomes技术平台，主要用作疫苗的载体，具有更好的免疫原性和耐受性，无需免疫佐剂。Virosomes与传统脂质体的区别在于，Virosomes的磷脂双分子层上嵌入了病毒的膜蛋白。这些蛋白可以保证Virosomes和免疫系统的细胞发生融合，进而将其所包被的特异性抗原递呈给免疫细胞。Virosomes不*可以模拟天然抗原的递呈方式，还可以同时引起体液免疫和细胞免疫，进而增强疫苗的有效性。目前已经开发了2个产品，一个是流感疫苗（Inflexal.V），一个是甲肝疫苗（Epaxal.）。

3.5 Biomira

Biomira公司正在开发BLP25脂质体疫苗，该疫苗可以使机体对**相关抗原mucinMUC1产生特异性的细胞免疫反应。Biomira所用的抗原是人工合成的，而非天然的。首先通过高通道筛选得到具有免疫原性的短肽，将此短肽和脂类物质连接，就获得了强免疫原性的人工抗原。制备脂质体时，可将此人工抗原和佐剂掺入进去，得到脂质体疫苗。

3.6 INEX

INEX的创始人Pietercullis是脂质体领域非常**的人物。他做了许多重要的工作，如挤出仪的发明，pH梯度法的发明等等。INEX的技术主要有2个，靶向化疗技术和靶向免疫**技术。靶向化疗技术是以主动载药为基础的。采用该技术平台，INEX公司正在开发3个产品，OncoTCS(长春新碱脂质体)、TopotecanTCS(盐酸拓扑替康脂质体注射液，和GlaxoSmithkline合作开发)和VinorelbineTCS(长春瑞宾脂质体)。INEX的靶向免疫**平台则是以Oligovax为基础的。Oligovax实际上就是脂质体包封的一段具有特定序列的寡核苷酸。此寡核苷酸片段具有免疫增强活性。当Oligovax和特异性的抗原联用时，可以**增强机体对特异性抗原的免疫反应。目前INEX公司正在进行Oligovax和TRP-2（tyrosinaserelatedprotein-2,一种黑色素瘤相关抗原）联用**黑色素瘤的研究。

3.7 Lipoxen

Lipoxen是一家英国公司，致力于研发脂质体疫苗。该公司的技术平台ImuXen.和一种脂质体制备技术脱水-再水化相关。采用此技术制备蛋白质-DNA疫苗的脂质体制剂，包括如下步骤：1）制备小单室脂质体；2）将小单室脂质体，疫苗和二糖按适当的比例混合后冻干；3）在适宜的条件下水化。采用该技术，可以有效的提高疫苗的包封效率。

3.8 Neopharm

Neopharm公司的**技术在于制备脂质体时采用了一种人工合成的心磷脂四豆蔻酰甘油心磷脂。由于此心磷脂的特性，它可以和亲脂**物强烈作用，将药物稳定的嵌在脂质体膜中，进而提高了制剂在体内和体外的稳定性。目前正在开发的产品有4个,LE-SN38、LE-rafAON、LEM和LEP。SN38是伊立替康（irinotecan）的活性代谢产物，由于SN-38不能溶于常用的药用溶剂，所以无法直接给药，将SN-38制成脂质体之后，可以解决上述问题。LE-rafAON包裹的是抗c-raf的反义寡核苷酸。LE-rafAON可以抑制**产生的Raf-1蛋白，进而抑制**生长并提高**对放疗和化疗的敏感性。该公司还有另外2个在研产品为（米托蒽醌脂质体，mitoxantrone）和LEP(紫杉醇脂质体，paclitaxel)。

3.9 Skyepharma

Skyepharma公司的技术平台为Depofoam，是微米级的、蜂窝状的磷脂双层结构，实际上它是一种比较特殊的多室脂质体。当采用二次乳化法制备脂质体时，如果油相中含有甘油三酯，就会得到Depofoam.。目前已经成功开发了2个品种Depomorphine.和Depocyt.。Depocyt.主要用于**淋巴性脑膜炎。将阿糖胞苷制成Depocyt.后，给药次数从每2天1次减少为每3周1次，极大的改善了病人的顺应性。Depomorphine.主要用于缓解手术后疼痛。传统的**制剂由于作用时间短，需要多次给药。而Depomorphine.的作用可以持续48h，这段时间正是手术后疼痛的高峰期。

此外，还有一些公司开发脂质体技术。Transave主要研究可用于吸入**的脂类复合物和脂质体制剂，其开发重点是**肺病的脂质体***、化疗药物和基因**药物。奥地利Polymun公司采用交叉流注射（cross-flowinjection）制备技术，目前在研产品有Cu-Zn超氧化物歧化酶。Gilead公司的脂质体技术主要来自Nexstar。Nexstar在被Gilead收并之前，曾经开发了2个脂质体产品，AmBisome.和DaunoXome.，即两性霉素B脂质体和柔红霉素脂质体。其中柔红霉素脂质体的制备主要得力于主动载药法-pH梯度法的发明。Elan收购了liposomecompany，也开始从事脂质体药物的研发工作。目前elan已经上市了一个脂质体产品Myocet.（阿霉素柠檬酸盐脂质体注射液），主要用于**乳腺*。Celsion公司与Duke大学合作，开发阿霉素热敏脂质体ThermoDox。热敏脂质体可以克服传统脂质体所遇到的一些问题：如药物在**区释放太慢，达不到有效浓度，可能导致**的耐药性等等。该公司的热敏脂质体制剂可以在40～42℃迅速释放绝大多数药物。和微波热疗技术相结合，其热敏脂质体技术可以成功的应用于临床。

4.脂质体国外上市在研产品

阿霉素脂质体Doxil是世界上**个抗**药物脂质体，属于PEG修饰的隐形脂质体，采用pH梯度法包封阿霉素，除脂质体疫苗外，已上市的脂质体药物主要是细胞毒类**药，如伊立替康、多柔比星、阿糖胞苷、柔红霉素、长春新碱和紫杉醇，除此以外还有镇痛药**，***布比卡因，抗**药两性霉素B。Celator公司的CPX-351是公司利用其新型纳米载药技术结合cytarabine（阿糖胞苷）和daunorubicin（柔红霉素）两种**药物的新剂型。在CPX-351中，两种药物的比例为5:1。Enceladus Pharmaceuticals宣布临床IIa期Nanocort**活动性溃疡性结肠炎患者的积极研究结果。Nanocort是一种新型静脉注射的针对性聚乙二醇脂质体泼尼松龙产品，给药两次后，70%的患者有明显改善，疗效**。阿拉迪姆公司（ ARDM ）进行吸入环丙沙星脂质体**支气管扩张症Ⅲ阶段临床试验。

在美国上市脂质体新产品：2011年.Exparel®（布比卡因多囊脂质体），2012年Marqibo®（硫酸长春新碱脂质体），2015年Onivyde®（伊立替康脂质体），2017年VYXEOS®（柔红霉素/阿糖胞苷复方脂质体）。2018年9月28日，Insmed公司的ARIKAYCE® KIT（阿米卡星脂质体吸入悬浮液）在美国获批， 2018年初Bayer在阿米卡星吸入剂III期临床失败后中止了该品种的开发。

5.国内上市脂质体产品

由于投入风险大、工业化困难等原因，至今国内上市的品种仍然较少。国内有三个脂质体产品上市共8个批准文号。

5.1.注射用紫杉醇脂质体 (南京绿叶制药有限公司 国药准字H20030357)

5.2.盐酸多柔比星脂质体注射液 (石药集团欧意药业有限公司 国药准字H20163178，国药准字H20113320)

5.3.盐酸多柔比星脂质体注射液 (常州金远药业制造有限公司 国药准字H20173060)

5.4.盐酸多柔比星脂质体注射液 (上海复旦张江生物医药股份有限公司 国药准字H20084432，国药准字H20123224)

5.5.盐酸多柔比星脂质体注射液 (常州金远药业制造有限公司 国药准字H20123273 )

5.6.注射用两性霉素B脂质体 (上海上药新亚药业有限公司 国药准字H20030892)

6.致敬中国从事脂质体研究的主要院校专家：

沈阳药科大学：顾学裘、邓英杰、邓意辉、陈大为

其中顾学裘是中国*早研究脂质体的专家，曾研制139油酸多相脂质体。邓英杰教授的科研小组研制出了热敏长循环脂质体、热敏磁性脂质体等。β-榄香烯脂质体、灯盏花素脂质体注射用冻干粉针和灯盏花素脂质体口服制剂、辅酶Q10脂质体等项目已完成临床前研究。发明了单相溶液冻干法、叔丁醇/水共溶剂体系冻干法和复乳冻干法这三种独特的脂质体制备新技术。

还有以下院校专家：

北京大学：吕万良、张强；四川大学华西药学院：何勤、张志荣；华东理工大学：安学勤；南京中医药大学：陈军；北京**医学科学院：梅兴国；南京中医药大学：蔡宝昌；中国药科大学：平其能、柯学；吉林大学：尹秀菊；中南大学：曾昭武；广州中医药大学：关世侠；重庆中医药大学：徐晓玉；复旦大学：陆伟跃等。

7.**和文献查询

查阅**步骤：orange book然后欧洲**局，然后中国**局。

orange book搜索 http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/ob/docs/queryai.cfm 再看如下 Patent and Exclusivity Info for this product: View 获取制剂**信息，根据其美国**信息到欧洲**局查PCT**---是否指定中国， 再查中国**（需要看法律状态--授权或驳回、撤销；如果实质审查，需要自己判断**权利要求更改的程度---按照目前的审查要求，国外申请的制剂**通常权利要求都要缩小范围） 。查**就是一种方法，可以从**上找到原研药的上市国家上市时间等信息，进而到相应的网站寻找说明书。 http://www.pss-system.gov.cn/sipopublicsearch/search/searchHome-searchIndex.shtml?params=991CFE73D4DF553253D44E119219BF31366856FF4B152226CAE4DB031259396A

脂质体**举例：美国**US7718189记载了阿米卡星脂质体悬浮液的制备方法，该方法创新地获得了较小粒径的脂质体，并且实现了水溶**物的超高药脂比（>1），590mg/8.4mL的ARIKAYCE®KIT （相当于硫酸阿米卡星623mg/8.4mL），使用由PARI Pharma GmbH生产的eFlow雾化系统进行**一次的给药，用于**鸟型分枝杆菌（MAC）导致的非结核分枝杆菌（NTM）肺病。这是美国**种也是**一种专门用于**由MAC引起的NTM肺病的**方法。该品种使用电荷中性脂质体将阿米卡星直接送到肺部，在肺部药物会被NTM**的肺巨噬细胞所吸收，延长了阿米卡星在肺部的释放，同时减少了全身暴露，从而降低了全身毒性。

下面是常用国外药监局的网址汇总，输入脂质体药物名称可以查到很多信息。

FDA美国药监局：

https://www.fda.gov/，搜索药物名称，点击申请号， 看Approval History, Letters, Reviews, and Related Documents，点击进入，拉到**下，*早时间—approval 右侧一栏，review，点击

EMA欧盟药监局：

http://www.ema.europa.eu/ema/index.jsp?curl=pages/includes/medicines/medicines_l

阿根廷药监局：

http://www.anmat.gov.ar/aplicaciones_net/applications/consultas/lomac/index.asp

土耳其药监局网站：https://www.titck.gov.tr/kubkt

EMA网站：https://www.ema.europa.eu/en/medicines  

俄罗斯官方网站：https://health.mail.ru/

法国药监局：www.theriaque.org

http://www.ema.europa.eu/ema/ http://www.info.pmda.go.jp/psearch/html/menu_tenpu_base.html http://www.medicines.org.uk/emc/ http://www.rxlist.com/script/main/hp.asp

查询日本原研**，查询日本药品信息需要把英文名转换成日文名，可以用日本通用名数据库网站转换。

网址：http://moldb.nihs.go.jp/jan/Default.aspx http://www.kegg.jp/kegg/drug/drug_ja.html

其他药品查询网址：

http://www.ema.europa.eu/ema/

http://www.info.pmda.go.jp/psearch/html/menu_tenpu_base.html

http://www.medicines.org.uk/emc/

http://www.rxlist.com/script/main/hp.asp

8.关键脂质体辅料供应商

国外脂质体辅料主要供应商有美国Avanti PolarLipids公司，瑞士Cordenpharma公司，德国Lipoid GmbH公司和日本NOF公司等。国内因脂质体品种较少，脂质体辅料的供应商也非常少。艾伟拓（上海）医药科技有限公司可为中国脂质体生产研发客户提供多种磷脂辅料，胆固醇 CHO-HP（供注射用），注射用蔗糖等**脂质体辅料产品。

9.脂质体相关主要书籍：

热爱书吧，翻翻有惊喜。比如这本《现代给药系统的理论和实践 第2版》，书中有多个国外上市脂质体和类似产品详细**工艺可以参考。例如：DaunoXome，盐酸柔红霉素脂质体浓缩液，**：主药53.46mg（相当于柔红霉素50mg）;DSPC 753mg;Chol 180mg (DSPC/Chol=2/1,mol);Citrate Acid 7mg;Sucrose 2125mg;甘氨酸 94mg;CaCl2 7mg;适量的HCl，NaOH，水调节pH.制备方法：主动载药法，包封主药50mg，规格：25mL，临用前用5%Glu稀释到0.2~1mg/mL静脉滴注30~60min，6h内必须用完。注意：不可用含盐的溶液稀释！粒径：45nm；pH4.5~6.5；2~8度保质期6month。

郑老师翻译的这本《可注射缓释制剂》，虽然书名没有脂质体的字样，但里面有很多脂质体，脂质递送系统的内容，到现在对脂质体方面的研究也有很好的指导作用。

以下为脂质体相关主要书籍：

《脂质体制备及其在生物医学中的应用》张灵芝 - 北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1998年

《现代给药系统的理论和实践 第2版》作者:(德)Rainer H.Muller,(德)Gesine E Hildebrand著;胡晋红主译 出版:北京:人民军医出版社，2004年

《可注射缓释制剂》(英)西尼尔,(英)拉多米斯基主编,郑俊民等译,化学工业出版社，20050901

《榄香烯脂质体抗**中西医结合基础与临床研究》谢恬主编

《基于脂质的纳米载体在药物递送和诊断中的应用》作者****·拉扎·沙赫，刘颖主译。科学出版社，2019年

《现代药物制剂技术丛书·脂质体技术》,邓英杰主编,人民卫生出版社，2007年

《微载体药物递送系统》作者梅兴国，华中科技大学出版社，2009年

《抗**药物脂质体研究》，孙维彤著

《国外药学专著译丛—脂质体（原着第2版）》,V．P．托尔钦林 V．魏西希主编，邓意辉等译

10.结语

脂质体就是一座金矿，但开发生产的难度很大，开发脂质体需解决粒度分布、载药率、包封率、无菌度、稳定性和产业化等诸多难题，同时**辅料欠缺，产业化设备缺乏，生产设备也多为厂家定制，难以直接购买。面对这些难题，多查文献，接受脂质体传承，借鉴前人的经验就非常重要。全球已经批了10余个脂质体药物，而我国*批了3个，多个有前景的产品并未进入中国，具有很大的仿制空间。未来，脂质体国内市场必将高速崛起。

 

参考文献：

1.《现代给药系统的理论和实践 第2版》作者:(德)Rainer H.Muller,(德)Gesine E Hildebrand著;胡晋红主译 出版:北京:人民军医出版社，2004年

2.仿制药原研**查询方法https://zhiku.bopuyun.com/p/112810344639

3.李春雷，邓英杰。国外部分公司脂质体药物研发现状[J]。中国药剂学杂志，2004，2(3)：73-75。

4. Lasic D.D.. Novel applications of liposomes[J]. Trends Biotechnol. 1998, 16(7): 307-321.

5. Mantripragada S. A lipid based depot (DepoFoam technology) for sustained release drug delivery [J]. Prog Lipid Res, 2002, 41(5): 392-406.

6.Abra RM, Bankert RB, Chen F, et al. The next generation of liposome delivery systems: recent experience with tumor-targeted, sterically-stabilized immunoliposomes and active-loading gradients [J]. J Liposome Res, 2002, 12 (1-2): 1-3.